淫羊藿（Epimedium） ，多年生草本植物 ，具有补肾阳 、强筋骨 、祛风湿功效 ，是临床常用中药 。淫羊藿苷（Icaritin ，ICA）是淫羊藿的主要活性单体 。研究表明 ，ICA具有防治骨质疏松症 、抗肿瘤 、免疫调节 、改善生殖功能 、降血糖及保护神经系统等作用 。然而 ，ICA在葡萄膜炎中的作用仍然不明确 。

       2022年3月18日 ，重庆医科大学附属第一医院侯胜平教授团队在Redox Biol （IF=11.799）发表中药小分子ICA治疗葡萄膜炎的作用机制研究 ，发现ICA通过激活其作用靶点PRDX3发挥对葡萄膜炎的治疗作用 ，体内外抑制PRDX3可消除ICA的治疗作用¹ 。

01 

ICA调节视网膜小胶质细胞 M1/M2 表型极化来缓解葡萄膜炎

       研究人员首先通过体内实验发现ICA减轻了实验性自身免疫性葡萄膜炎（Experimental autoimmune uveitis ，EAU）小鼠的眼内炎症（图1A） 。随后通过对特定小胶质细胞标志物IBA1的免疫荧光染色发现EAU组中有许多活化的小胶质细胞 ，而与对照组相比 ，ICA处理的小鼠中的小胶质细胞表现出与正常组相似的形态和IBA1表达水平 ，表明小胶质细胞的活化被ICA阻断（图1B） ，最后通过Western Blot检测M1小胶质细胞标志物（TNF-α 、COX-2 、iNOS）和M2小胶质细胞标志物（ARG1 、CD206和IL-10）表达情况 ，发现EAU组表现出M1标志物的蛋白质表达升高和M2标志物的蛋白质水平降低 ，而ICA治疗逆转了EAU引发的小胶质细胞M1型极化 ，表明ICA可促进小胶质细胞M1型向M2型极化（图1C） 。

图1 ICA调节视网膜小胶质细胞 M1/M2 表型极化来缓解葡萄膜炎

02

人类蛋白质组芯片发现ICA直接作用靶点PRDX3

       然而 ，ICA的直接药理学靶点尚不清楚 ，为此 ，研究人员采用人类蛋白质组芯片（腾博会官网生物提供该技术服务）和分子模拟来识别ICA的分子靶点 。

       研究人员将生物素标记的 ICA (Biotin-ICA) 或生物素与人类蛋白质组芯片一起孵育 ，并使用Cy5偶联的链霉亲和素 (Cy5-SA)鉴定和ICA结合能力的蛋白质（图2A） 。结果发现了246种蛋白质被鉴定为ICA特异性结合的候选蛋白 ，通过数据评估和筛选 ，最终选择了22种高结合力的蛋白（图2B） 。其中排名最高的蛋白ALDH9A1在对照 、EAU 或 EAU + ICA 组三组中没有观察到任何改变 ，排名第二的PRDX3是抗氧化功能的线粒体蛋白 ，已有研究表明氧化应激在葡萄膜炎的进展中起着至关重要的作用 。因此 ，研究人员选择PRDX3进行验证（图2C） 。进一步分子对接表明 ，ICA上的羟基与PRDX3蛋白的Lys135 、Glu162以及Thr44形成氢键（图2D） ，体外实验结果表明ICA以浓度和时间依赖性方式增加PRDX3蛋白的表达（图2E） 。

图2 人类蛋白质组芯片发现ICA直接药理学靶点PRDX3

03

PRDX3 敲低逆转ICA引起的EAU治疗作用

       为了确定ICA是否通过增加PRDX3引起对EAU的疗效 ，研究人员在EAU小鼠免疫后第7天 ，玻璃体内注射PRDX3-shRNA和Vehicle-shRNA ，连续7天ICA（10 mg/kg）灌胃 ，发现注射PRDX3-shRNA逆转了ICA引起的EAU治疗作用（图3A 、3B） ，且阻断PRDX3后不再检测到ICA引起的M1型极化降低和M2型极化增加（图3C） 。结果证实了ICA引发抗葡萄膜炎过程中PRDX3起着至关重要的作用 。

图3 PRDX3 敲低逆转ICA引起的EAU治疗作用

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